НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ <КЧС-СЕРОТЕСТ>

Внимание! Этот справочник доступен на CD. Подробная информация обо всех препаратах, удобный поиск, автоматическое обновление каталога. Подробнее »»

Алфавитный указатель | Препараты по производителям | Препараты по заболеваниям | Поиск

Название: НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ <КЧС-СЕРОТЕСТ>
Состав и форма выпуска: Планшет для иммуноферментного анализа с иммобилизованным рекомбинантным антигеном E2 вируса КЧС — 1 шт. Положительная сыворотка свиньи (К+), 0,5 мл — 1 фл. (прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость желто-красного цвета). 20 — кратный концентрат фосфатно-солевого буфера с Твином 20 для промывки планшетов (ФСБТ), 50 мл — 2 фл. по 25 мл. Буфер для разведения сывороток (БР), 10 мл — 1 фл. Конъюгат моноклональных антител к вирусу КЧС с пероксидазой хрена (Конъюгат), 10 мл — 1 фл (прозрачная жидкость розового цвета). Субстратный раствор с перекисью водорода для разведения хромогена (СР), 5 мл — 1 фл. Хромоген, тетраметилбензидин (ТМБ), 5 мл — 1 фл. 1 N Серная кислота (топ-раствор), 5 мл — 1 фл. В наборе содержатся все необходимые для проведения анализа реактивы, за исключением дистиллированной воды. В качестве дополнительного оборудования необходимы микропипетки вместимостью 10, 100, 200 и 1000 мкл, мерная лабораторная посуда, суховоздушный термостат с температурой 37 °C, спектрофотометр с длинной волны 450 нм.
Фармакологические свойства: Метод основан на конкурентном взаимодействия конъюгированных с пероксидазой моноклональных антител к оболочечному белку E2 вируса КЧС и сывороточной вирусспецифических антител с иммобилизованным на поверхности иммунологического планшета рекомбинантным белком E2. При отсутствии в исследуемой сыворотке вирусспецифических антител, моноклональный конъюгат свободно взаимодействует с иммобилизованным E2 и после добавления субстрата и хромогена в лунке развивается окраска. Если исследуемая сыворотка содержит вирусспецифические антитела, происходит их взаимодействие с иммобилизованным E2, его частичная или полная блокировка, в результате чего связывается конъюгата с антигеном, и, соответственно, интенсивность окраски снижается. Таким образом, интенсивность окраски обратно пропорциональна количеству антител в исследуемой сыворотке.
Показания: Для выявления антител к вирусу классической чумы свиней (КЧС) в сыворотке крови иммуноферментным методом с целью диагностики КЧС у невакцинированных животных и оценки напряженности иммунитета после вакцинации. Набор реагентов рассчитан для проведения на одном планшете одновременного анализа 46 исследуемых (в 2 повторах) и двух контрольных сывороток (в 2 повторах). Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения нескольких серий анализов по мере поступления биоматериала.
Дозы и способ применения: Подготовка биологического материла. Для анализа используют сыворотку крови. Образцы биоматериала хранят при температуре 4 °C, если анализ проводят не позднее 24 ч после отбора. Для более длительного хранения образцы замораживают и хранят при минус 20 °C. Замороженные образцы перед исследованием быстро (в течение 5 — 10 минут) размораживают нагреванием в водяной бане при температуре 37 °C. В случае выпадения осадка пробы обязательно осветляют центрифугированием 10 минут при 2000 g. Многократное замораживание и оттаивание образцов не допускается. Подготовка рабочих растворов. Перед началом работы все реагенты выдерживают не менее 0,5 ч при комнатной температуре и тщательно перемешивают. Рабочий раствор буфера для отмывания планшетов ФСБТ. Содержимое флакона № 4 разводят в 20 раз свежеприготовленной дистиллированной водой. Пример: к 20 мл концентрата добавляют 380 мл воды. При необходимости использования части компонентов следует иметь ввиду, что для обработки одного стрипа требуется примерно 20 мл рабочего раствора. Готовый рабочий раствор стабилен при температуре 4 °C в течение 7 суток. Рабочий хромоген-субстратный раствор. Раствор хромогена (ТМБ — флакон № 8) разводят субстратным раствором (СР, флакон № 7) в соотношении 1 к 1 и перемешивают. Пример: Для получения 2 мл рабочего хромоген-субстратного раствора к 1 мл раствора ТМБ добавляют 1 мл субстратного раствора. Раствор готовят непосредственно перед использованием. Буфер для разведения сыворотки (БР), № 5. Положительная сыворотка (K+), № 2. Отрицательная сыворотка (K-), № 3. Раствор конъюгата (Конъюгат), № 6. Стоп-раствор (1 Серная кислота), № 9 — готовы к употреблению. Проведения анализа. В лунки планшета вносят по 0,75 мл БР (из расчета по две лунки на каждый образец сыворотки и по 2 лунки для положительных и отрицательных контролей). В лунки A1 — B1 вносят по 0,05 мл K+.В лунки C1 — D1 вносят по 0,05 мл K^-.В остальные лунки планшета с буфером БР вносят по 0,05 мл исследуемой сыворотки (по две лунки на каждый образец сыворотки). Закрывают планшет липкой пленкой и инкубируют 1,5 час при комнатной температуре. Планшет 5 раз промывают буфером ФСБТ (300 мкл/лунку), каждый раз полностью удаляя жидкость из лунок постукиванием перевернутого планшета по фильтровальной бумаге. При этой операции возможно выпадение стрипов из рамки! Рекомендуется отмаркировать каждый стрип для восстановления из первоначального расположения. В каждую лунку добавляют по 0,1 мл раствора конъюгата. Планшет закрывают липкой пленкой и инкубируют 45 минут при 37 °C. Планшет 5 раз промывают буфером ФСБТ (из расчета 300 мкл/лунку), каждый раз полностью удаляя жидкость из лунок путем постукивания перевернутого планшета по фильтровальной бумаге. Добавляют в каждую лунку по 0,1 мл рабочего хромоген-субстратного раствора. Планшет инкубируют в темноте 20 минут при температуре 18 — 22 °C. Останавливают реакцию добавлением 0,05 мл стоп-раствора (1NH₂SO₄). После остановки реакции оптическую плотность субстратной смеси измеряют на спектрофотометре с вертикальным лучом при длине волны 450 нм (A₄₅₀). Учет и интерпретация результатов. Вычисляют среднее арифметическое значение оптической плотности (A₄₅₀) для всех проб K⁺ (A₄₅₀K⁺_ср). Вычисляют среднее арифметическое значение оптической плотности (A₄₅₀) для всех проб K^- (A₄₅₀K⁺_ср). Вычисляют среднее значение оптической плотности (A₄₅₀) для каждой опытной пробы (ОП) (A₄₅₀ОП_ср).Вычисляют коэффициент ингибирования (K_инг) связывания конъюгата сывороточными антителами по формуле: K_инг = (A₄₅₀K^-_ср — A₄₅₀ОП_ср) / (A₄₅₀K^-_ср — A₄₅₀K⁺_ср) x 100 Величина (A₄₅₀K^-_ср — A₄₅₀K⁺_ср) является характеристикой работоспособности набора и должна составлять не менее 0,3. Если эта величина мене 0,3, к полученным результатам следует относиться как к сомнительным и, по возможности, повторить анализ. Пробу считают отрицательной, если величина K_инг менее 50 %. Если величина K_инг более 50 % пробу считают положительной. Если в сыворотке невакцинированного животного (исключая невакцинированных поросят от вакцинированных свиноматок, которые имеют колостральный иммунитет до 60 дневного возраста) обнаруживают антитела к вирусу КСЧ (K_инг выше50 %), это свидетельствует о контакте с вирусом и возможном заболевании. При исследовании напряженности поствакцинального иммунитета необходимо учитывать, что уровень вируснейтрализующих антител в сыворотке обеспечивает устойчивость животного к заражению вирулентным вирусом при K_инг выше 60 %. Так как развитие гуморального иммунитета начинается на 25 — 30 день после вакцинации, такой анализ рекомендуется проводить не ранее 25 дня после вакцинации.
Особые указания: Уровень антител к вирусу КЧС у животных может иметь существенные индивидуальные отличия. Для получения достоверных результатов, рекомендуется исследовать группы животных (не менее 10 голов), одинаковых по условиям содержания, возрасту и т. д. Не используйте объединенные сыворотки от разных животных. В случае сомнительных результатов рекомендуется повторить анализ тех же образцов сыворотки и применить другие методы анализа антител (реакцию нейтрализации или цитохимический вариант иммуноферментного анализа).
Условия хранения: В сухом, темном месте при температуре от 2 до 8 °C и относительной влажности не более 80 %. Срок годности набора — 12 месяцев. Замораживание ингредиентов комплекта не допускается. Все исходные компоненты набора стабильны до истечения срока годности. Оставшиеся после частичного использования компоненты должны храниться плотно закрытыми в заводской упаковке. Не переливать в другую посуду. Не смешивать компоненты из наборов разных серий.
Производитель: НАРВАК НПО ЗАО, Россия
Адрес: 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 16.
Тел./факс: (495) 916-10-67, 916-17-05, 916-11-59,
190-75-61, 190-28-72, 190-30-54, 787-69-32, 787-69-33

Подробнее о производителе

Все препараты производства НАРВАК НПО ЗАО, Россия
Продавец: Место Вашей рекламы

По вопросам размещения информации

о ветеринарных препаратах и кормовых добавках

в Электронном справочнике "Ветеринарные препараты в России"

и заключения договоров на публикацию

обращайтесь в ООО "Ветторг" по электронной почте: vettorg@mail.ru