НАБОР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА (ВЛКРС) МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА) - VERI TEST

Внимание! Этот справочник доступен на CD. Подробная информация обо всех препаратах, удобный поиск, автоматическое обновление каталога. Подробнее »»

Алфавитный указатель | Препараты по производителям | Препараты по заболеваниям | Поиск

Название

НАБОР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА (ВЛКРС) МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА) — VERI TEST

Состав и форма выпуска

Включает в себя следующие компоненты: две полистироловые 96 — луночные микропанели с адсорбированными в лунках специфическим антигеном gp 51 ВЛКРС (нечетные ряды) и контрольным отрицательным антигеном (четные ряды); положительные контроли: флакон № 1: специфическая сыворотка крови, содержащая антитела к gp 51 ВЛКРС — прозрачная жидкость соломенно-желтого цвета, 0,1 мл — 1 флакон; отрицательные контроли: флакон № 2: нормальная сыворотка крови — прозрачная жидкость соломенно-желтого цвета, 0,1 мл — 1 флакон; флакон № 3: молоко, содержащее антитела к gp 51 ВЛКРС — жидкость белого цвета, 1 — 2,5 мл — 1 флакон; флакон № 4: молоко, не содержащее антител к gp 51 ВЛКРС — жидкость белого цвета,, 2,5 мл — 1 флакон; флакон № 5: промывочный буфер (ФСБТ, фосфатно-солевой буфер, содержащий 0,05 % твина) — концентрированный 20 раствор — бесцветная прозрачная жидкость, 25 мл — 3 флакона; или таблетка, рассчитанная на 500 мл буфера — 4 шт; флакон № 6: буфер для разведения образцов (БР) — бесцветная прозрачная жидкость, 20 мл — 1 флакон; флакон № 7: конъюгат (моноклональные антитела к IgG крупного рогатого скота, меченые пероксидазой), лиофильно высушенный — 2 флакона, каждый из которых содержит таблетку белого цвета; флакон № 8: субстрат — раствор тетраметилбензидина (ТМБ), содержащий перекись водорода, бесцветная прозрачная жидкость, 20 мл — 1 флакон; флакон № 9: стоп-раствор, раствор для остановки реакции — бесцветная прозрачная жидкость, содержащая H2 SO4, 10 мл — 1 флакон.

Фармакологические свойства

Набор расчитан на 44 испытуемых проб на каждой микропанели. Антиген gp 51 ВЛКРС, иммобилизованный на поверхности лунок полистироловой микропанели с помощью специфических моноклональных антител, связывается с антителами, присутствующими в исследуемом материале, формируя при этом комплекс антиген-антитело. Полученный иммунный комплекс выявляется после взаимодействия с антивидовым конъюгатом (моноклональные антитела к IgG крупного рогатого скота, меченые пероксидазой), фермент которого после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат-индикаторного раствора и образование окрашенного продукта. При этом интенсивность окраски в лунке микропанели пропорциональна содержанию ВЛКРС-специфических антител в исследуемой пробе.

Показания

Для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) в сыворотке крови и в молоке крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа.

Дозы и способ применения

Для исследования в лабораторию доставляют из хозяйств индивидуальные сыворотки крови крупного рогатого скота или пробы молока объемом 0,3 — 0,5 мл. Сыворотки можно хранить при температуре 4 °C не более 3 суток или при температуре минус 20 °С в течение 50 — 60 суток. Перед проведением ИФА молоко центрифугируют в течение 15 минут при 2000 — 3000 об/мин для удаления липидов. Для постановки ИФА необходимы одно- и многоканальные автоматические микропипетки разных объемов со сменными наконечниками, мерная лабораторная посуда, дистиллированная вода, спектрофотометр (ридер) с фильтром на 450 нм. Перед началом работы микропанели и все компоненты набора выдерживают 20 — 30 минут при комнатной температуре. Неиспользованные реагенты убирают в холодильник (2 — 8 °C) сразу же после проведения исследования. Приготовление рабочих растворов реагентов. ФСБТ. Концентрированный раствор буфера (флакон № 5) разводят в 20 раз дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Для этого содержимое одного флакона концентрата (25 мл) переносят в мерную колбу и добавляют в нее 475 мл воды. Если в концентрате присутствуют кристаллы, то его перед разведением нагревают и тщательно взбалтывают. Конъюгат. Во флакон № 7 осторожно добавляют 10,5 мл ФСБТ, выдерживают 1 минуту и тщательно перемешивают, сильно не взбалтывая. Готовят непосредственно перед использованием. Все остальные компоненты набора готовы к употреблению. Постановка реакции. Во все использованные лунки микропанели вносят по 100 мкл БР (флакон № 6), затем в эти лунки вносят контрольные и испытуемые пробы, используя для каждого образца новый . Для исследования сывороток крови крупного рогатого скота берут по 4 мкл положительной, отрицательной и испытуемых сывороток и вносят их в соответствующие лунки, сенсибилизированные специфическим антигеном gp 51 ВЛКРС (нечетные ряды) и контрольным отрицательным антигеном (четные ряды); для исследования молока крупного рогатого скота берут по 100 мкл положительной, отрицательной и испытуемых проб молока и вносят их в соответствующие лунки, сенсибилизированные специфическим антигеном (четные ряды). После внесения проб содержимое лунок тщательно перемешивают, микропанель помещают в пластиковый пакет или накрывают крышкой и инкубируют 1 ч при 37 °C или 4 ч при комнатной температуре. После инкубации лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают ФСБТ, каждый раз полностью заполняя лунки буфером и вытряхивая содержимое. Затем микропанель подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Во все используемые лунки микропанели вносят по 100 мкл раствора конъюгата, микропанель помещают в пластиковый пакет или накрывают крышкой и выдерживают 1 ч при 37 °C. После инкубации проводят процедуру промывания лунок. Во все используемые лунки микропанели вносят по 100 мкл раствора субстрата (флакон № 8) и выдерживают 10 минут при комнатной температуре. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 50 мкл стоп-раствора (флакон № 9). Визуальный учет. Все лунки с адсорбированным контрольным отрицательным антигеном (четные ряды) должны оставаться бесцветными (до и после остановки реакции). Реакция в лунках с адсорбированным специфическим антигеном gp 51 ВЛКРС (нечетные ряды) должны быть следующей: лунки с внесенным положительным контролем должны иметь сине-голубое окрашивание до остановки реакции (желтое после остановки реакции); лунки с внесенным отрицательным контролем должны оставаться бесцветными (до и после остановки реакции); лунки с исследуемыми образцами, в которых присутствуют специфические антитела, должны иметь сине-голубое окрашивание до остановки реакции (желтое после остановки реакции) различной интенсивности в зависимости от уровня антител. Реакцию считают положительной, когда заметна четкая разница в интенсивности окрашивания лунок с исследуемыми образцами и лунок с отрицательным контролем. Инструментальный учет. Для проведения инструментального учета сразу после остановки реакции проводят измерения оптической плотности (О. П.) продукта в каждой лунке на спектрофотометре (ридере) с вертикальным лучом света при длине волны 450 нм. Далее проводят оценку результатов волны 450 нм. На первом этапе вычисляют окончательный показатель О. П. каждой пробы (∆ О. П.) по разнице между О. П. пробы в лунках со специфическим и контрольным антигенами: ∆ О. П. пробы = О. П. специфический антиген gpp 51 ВЛКРС — О. П. контрольный отрицательный антиген. Предварительно проводят оценку ∆ О. П. отрицательного и положительного контролей, входящих в состав набора. Результаты реакции считаются достоверными и могут быть учтены, если контрольные показатели соответствуют следующим критериям: ∆ О. П. отрицательного контроля < 0,1; ∆ О. П. положительного контроля > 1. Если полученные значения не соответствуют вышеуказанным критериям, результаты ИФА считаются недостоверными и реакцию повторяют. Если ∆ О. П. отрицательного и положительного контролей соответствует вышеуказанным критериям, то далее проводят оценку результатов реакции в лунках с испытуемыми пробами, вычисляя ∆ О. П. для каждой. Относительное содержание антител к ВЛКРС в исследуемых образцах, выраженное в международных ИФА-единицах (EU) определяют по отношению значения ∆ О. П. испытуемой пробы к значению ∆ О. П. положительного контроля по формуле: EU = (∆ О. П. испытуемой пробы)/(∆ О. П. положительного контроля) = 100, где 100 является EU положительного контроля. Интерпретацию результатов ИФА проводят с использованием прилагаемой таблицы:

Исследуемый материал	Значение EU	Интерпретация результатов
Сыворотка крови	менее 10	отрицательная реакция
Сыворотка крови	≥10	положительная реакция
Молоко	менее 6	отрицательная реакция
Молоко	≥6	положительная реакция

Пример расчета содержания антител к ВЛКРС в испытуемых образцах: Контрольные показатели ∆ О. П. 450 нм: отрицательного контроля — 0,001; положительного контроля — 2,306. Все показатели соответствуют требуемым критериям. ∆ О. П.450 нм испытуемых сывороток: № 1 — 2,200 и № 2 — 0,010. EU = 2,200 / 2,306 x 100 = 95,4 EU = 0,010 / 2,306 x 100 = 0,4 Таким образом, в исследуемой пробе сыворотке крови № 1 установлен высокий уровень антител к ВЛКРС (положительная реакция), в сыворотке крови № 2 специфических антител нет, что является отрицательным результатом ИФА. При получении сомнительного результата (например, значение EU в сыворотке крови равно 9 или 11) рекомендуется повторить реакцию и провести исследование пробы в двух параллельных лунках. Следует помнить, что ИФА является высокочувствительным методом, поэтому ошибки, связанные с внесением образцов, проведением инкубационного, температурного и промывочного режимов могут быть причиной получения недостоверных результатов.

Особые указания

Флаконы без этикеток, с нарушением целостности, изменением консистенции или цвета компонентов подлежат выбраковке. Работу с химическими компонентами набора следует проводить с соблюдением правил техники безопасности. При попадании их на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды. Использованные микропанели обеззараживают раствором хлорамина или другими сильными окислителями. Запрещается прием пиши и воды, курение в помещении, где проводятся работы с компонентами набора.

Условия хранения

В сухом, темном месте при температуре от 2 до 8 °C. Срок годности — 12 месяцев. Не допускается замораживание компонентов.

Производитель

НАРВАК НПО ЗАО, Россия

Адрес: 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 16.
Тел./факс: (495) 916-10-67, 916-17-05, 916-11-59,
190-75-61, 190-28-72, 190-30-54, 787-69-32, 787-69-33

Подробнее о производителе

Все препараты производства НАРВАК НПО ЗАО, Россия

Продавец

Место Вашей рекламы

По вопросам размещения информации

о ветеринарных препаратах и кормовых добавках

в Электронном справочнике "Ветеринарные препараты в России"

и заключения договоров на публикацию

обращайтесь в ООО "Ветторг" по электронной почте: vettorg@mail.ru